近期，TwistDx推出(chu)了一系列全新的(de)液態重組酶聚合酶擴增(zeng) (RPA)試劑盒(he)(he)，這些試劑盒(he)(he)非常(chang)適合需要不使用(yong)熱(re)循(xun)環儀(yi)就(jiu)能(neng)在(zai)15分鐘內完成 DNA/RNA 擴增(zeng)的(de)實(shi)驗室以(yi)及想要靈活構建試驗體系的(de)研(yan)究人(ren)員使用(yong)。

TwistAmp® Liquid試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)盒提供經甘油(you)穩定(ding)化(hua)處理的(de)液(ye)態RPA試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)，該(gai)形態對于(yu)(yu)在實驗(yan)室(shi)執(zhi)行(xing) PCR 和(he)其(qi)他(ta)基于(yu)(yu)酶(mei)的(de)反應的(de)任(ren)何(he)人來說都(dou)非常熟悉。這些試(shi)(shi)劑(ji)(ji)(ji)各自裝(zhuang)于(yu)(yu)單獨(du)的(de)試(shi)(shi)管中，用戶可隨意從中移(yi)取任(ren)何(he)量的(de)酶(mei)混合液(ye)來構建自己所選的(de)RPA反應體積，配制用于(yu)(yu)多次反應的(de)預混液(ye)，或者以各種 RPA 組分(fen)比例進行(xing)實驗(yan)以優化(hua)試(shi)(shi)驗(yan)。

除了(le)具(ju)有室(shi)溫穩定(ding)性的凍(dong)干態TwistAmp® RPA試劑盒這一(yi)旗艦產品，本次新推出(chu)(chu)的 TwistAmp® Liquid試劑盒是(shi)現場或定(ding)點試驗開發的理想(xiang)之選。液體形態讓實驗室(shi)更(geng)容(rong)(rong)易(yi)地(di)(di)在日(ri)常工作中(zhong)使(shi)用快速(su)簡單的RPA法(fa)（該(gai)方(fang)法(fa)有時甚至采用與PCR相(xiang)同的引物(wu)）取代 PCR法(fa)，以及更(geng)容(rong)(rong)易(yi)地(di)(di)開發出(chu)(chu)定(ding)制的試驗。

產品組成:

相關擴展試劑盒額外提供試劑:

◆ 100 µl 50x 外切酶(mei) III (TwistAmp® Liquid exo/exo RT kits);

◆ 100 µl 50x 逆(ni)轉錄酶 (RT) (TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 100 µl of 陽性(xing)對照模板 (DNA with TwistAmp® Liquid exo/Basic kits, RNA with TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 45 µl of 陽性oligo mix (oligo mix consists of primers for Basic/Basic RT kits, primers plus a ?uorescently labelled exo probe in the exo/exo RT kits)

其他必需試劑(非試劑盒提供):

◆ ddH2O; dNTPs; 寡聚核苷酸(suan); RNase抑制劑(僅(jin)用于(yu)RT試劑盒)

產品信息:

附: TwistAmp liquid試劑盒Q&A

Q 20x核心反應mix有沉淀,是否影響其功能?

A在(zai)(zai)低溫(wen)保存時(shi), 重組酶(mei)和輔助(zhu)蛋白在(zai)(zai)50%甘(gan)油中(zhong)20x核心(xin)反(fan)應mix中(zhong)有時(shi)會發生可(ke)逆的共沉淀反(fan)應.所以在(zai)(zai)室(shi)溫(wen)融化混(hun)勻后(hou)離心(xin)使(shi)其返回(hui)溶液形(xing)式并不影響(xiang)其功能(neng)。

Q 使用Liquid試劑盒做多重實驗，能否制備master mix?

A 可(ke)以(yi)。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x E-mix可(ke)以(yi)預先混合，置(zhi)于冰(bing)上幾(ji)個(ge)小時(shi)，在很多實(shi)例中可(ke)以(yi)過夜保存（性能上有任(ren)何改變都(dou)需要客戶(hu)自行實(shi)驗和評價(jia)）。一(yi)旦加(jia)入20x核心酶，短(duan)期(qi)保存在冰(bing)上也是可(ke)以(yi)的。

Q 使用Liquid試劑盒如何提高重復率和RNA模板的擴增率?

A 先將RNA模板和醋(cu)酸(suan)鎂混合后(hou)加(jia)入反應(ying)體系中，RNA的(de)三級結(jie)構會(hui)抑制逆(ni)轉錄酶的(de)活性，所(suo)以加(jia)入RNA和醋(cu)酸(suan)鎂時，將兩者分(fen)別加(jia)到在管(guan)內(nei)壁兩側或者將醋(cu)酸(suan)酶加(jia)在管(guan)內(nei)蓋中，同時離心(xin)混入體系，這種操作會(hui)提高(gao)反應(ying)性能。

Q 在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，還能使用嗎?

A 可以(yi)。少量磷酸肌酸會發(fa)生沉淀不(bu)會影響RPA反(fan)應(ying)，只需在(zai)實驗前通過渦(wo)旋將沉淀重(zhong)懸離心即可。

Q 在使用Liquid試劑盒時，是否能夠使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?

A 可以，請參考

Q 小的RPA液體反應體系是多少?

A 小低至PL級，請參(can)考

Q 液體反應體系中需要加入多少dNTPs?

A 1.8mM(總(zong))dNTPs 作為起始(shi)量即可。用戶(hu)也可以根據自身實驗優化濃度(du),有時1-12mM均適用。

Q 如何提高擴增曲線的可重復性?

A 優化擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)曲線考(kao)慮(lv)以(yi)(yi)下(xia)(xia)因素(su): 對于低拷貝數模板，不(bu)穩定擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)可(ke)能(neng)是(shi)(shi)(shi)因為達到檢測限或者是(shi)(shi)(shi)反應(ying)混(hun)勻程度不(bu)同（未混(hun)勻的(de)反應(ying)擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)效(xiao)率不(bu)佳）。另外，在(zai)低溫情況下(xia)(xia)存貯(zhu)，重組酶(mei)和輔(fu)助蛋白在(zai)50%甘油情況下(xia)(xia)形成沉淀,也是(shi)(shi)(shi)可(ke)能(neng)導致不(bu)穩定擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)的(de)原(yuan)因。所以(yi)(yi)，20x核(he)心反應(ying)mix在(zai)室溫下(xia)(xia)解凍并(bing)震(zhen)蕩渦旋將使其(qi)成為液體，不(bu)影響其(qi)功(gong)能(neng),并(bing)且有效(xiao)提高擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)效(xiao)率。不(bu)穩定擴(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)也可(ke)能(neng)是(shi)(shi)(shi)因為master mix量不(bu)足，在(zai)加入體系前，用戶必須保證震(zhen)蕩后20x核(he)心反應(ying)組分均一(yi)。