近(jin)期，TwistDx推出了(le)一系列全新的(de)(de)液態重組(zu)酶(mei)聚合酶(mei)擴增 (RPA)試劑盒，這些試劑盒非常(chang)適合需(xu)要(yao)不使用熱循環(huan)儀就(jiu)能在15分鐘內完成 DNA/RNA 擴增的(de)(de)實(shi)驗(yan)(yan)室以及(ji)想要(yao)靈活構建(jian)試驗(yan)(yan)體系的(de)(de)研究人員(yuan)使用。

TwistAmp® Liquid試(shi)(shi)(shi)劑盒提供經(jing)甘(gan)油(you)穩定化(hua)處理的(de)液(ye)(ye)態RPA試(shi)(shi)(shi)劑，該形態對于在實(shi)驗(yan)室執(zhi)行 PCR 和其他基于酶(mei)的(de)反應的(de)任何人來說(shuo)都非常(chang)熟(shu)悉。這些(xie)試(shi)(shi)(shi)劑各(ge)自(zi)裝于單獨的(de)試(shi)(shi)(shi)管中，用戶可隨意從中移取任何量的(de)酶(mei)混(hun)合液(ye)(ye)來構(gou)建自(zi)己所(suo)選的(de)RPA反應體積，配(pei)制用于多次反應的(de)預混(hun)液(ye)(ye)，或者以(yi)各(ge)種 RPA 組分比例進行實(shi)驗(yan)以(yi)優(you)化(hua)試(shi)(shi)(shi)驗(yan)。

除了具有室溫穩定(ding)性的凍干態TwistAmp® RPA試(shi)劑(ji)盒這一旗艦產品，本次(ci)新(xin)推出的 TwistAmp® Liquid試(shi)劑(ji)盒是現場或定(ding)點試(shi)驗開(kai)發的理想之(zhi)選(xuan)。液體形(xing)態讓實驗室更(geng)(geng)容易地在(zai)日常工作(zuo)中使用(yong)快(kuai)速簡(jian)單的RPA法(fa)（該方(fang)法(fa)有時(shi)甚至(zhi)采用(yong)與PCR相同的引(yin)物）取代 PCR法(fa)，以(yi)及(ji)更(geng)(geng)容易地開(kai)發出定(ding)制的試(shi)驗。

產品組成:

相關擴展試劑盒額外提供試劑:

◆ 100 µ;l 50x 外切(qie)酶 III (TwistAmp® Liquid exo/exo RT kits);

◆ 100 µl 50x 逆轉錄(lu)酶 (RT) (TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 100 µl of 陽性對(dui)照模(mo)板(ban) (DNA with TwistAmp® Liquid exo/Basic kits, RNA with TwistAmp® Liquid Basic RT/exo RT kits);

◆ 45 µl of 陽性oligo mix (oligo mix consists of primers for Basic/Basic RT kits, primers plus a ?uorescently labelled exo probe in the exo/exo RT kits)

其他必需試劑(非試劑盒提供):

◆ ddH2O; dNTPs; 寡聚(ju)核苷酸; RNase抑制劑(僅用于(yu)RT試(shi)劑盒)

產品信息:

附: TwistAmp liquid試劑盒Q&A

Q 20x核心反應mix有沉淀,是否影響其功能?

A在低溫保存時(shi), 重組酶(mei)和輔助蛋白(bai)在50%甘油(you)中20x核心反應mix中有時(shi)會發(fa)生(sheng)可(ke)逆的共沉(chen)淀反應.所以在室溫融化混(hun)勻(yun)后離心使其返回溶液形式并不(bu)影(ying)響其功能。

Q 使用Liquid試劑盒做多重實驗，能否制備master mix?

A 可以(yi)。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x E-mix可以(yi)預(yu)先混合(he)，置于冰上(shang)幾個(ge)小時，在很(hen)多實例(li)中可以(yi)過夜保(bao)存（性能(neng)上(shang)有(you)任何改變都(dou)需要客戶自行實驗和評價）。一(yi)旦加入(ru)20x核(he)心酶(mei)，短(duan)期保(bao)存在冰上(shang)也(ye)是可以(yi)的。

Q 使用Liquid試劑盒如何提高重復率和RNA模板的擴增率?

A 先將(jiang)RNA模板(ban)和醋酸(suan)鎂(mei)(mei)混合后加(jia)(jia)入(ru)反(fan)應(ying)體(ti)系中(zhong)，RNA的(de)三級結構會抑制逆轉錄酶的(de)活性，所以加(jia)(jia)入(ru)RNA和醋酸(suan)鎂(mei)(mei)時，將(jiang)兩(liang)者分別加(jia)(jia)到在管(guan)(guan)內壁(bi)兩(liang)側(ce)或者將(jiang)醋酸(suan)酶加(jia)(jia)在管(guan)(guan)內蓋中(zhong)，同時離心混入(ru)體(ti)系，這(zhe)種操(cao)作會提高(gao)反(fan)應(ying)性能(neng)。

Q 在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，還能使用嗎?

A 可以。少量磷(lin)酸肌酸會發生(sheng)沉淀(dian)不會影響RPA反應，只(zhi)需在實(shi)驗前通過渦(wo)旋將沉淀(dian)重懸離心即可。

Q 在使用Liquid試劑盒時，是否能夠使用dUTP/生物素（酰）化dUTP?

A 可以，請參考

Q 小的RPA液體反應體系是多少?

A 小低至PL級，請(qing)參考(kao)

Q 液體反應體系中需要加入多少dNTPs?

A 1.8mM(總)dNTPs 作為(wei)起(qi)始量即可(ke)。用戶也(ye)可(ke)以根據自身實(shi)驗(yan)優化(hua)濃度,有時1-12mM均適用。

Q 如何提高擴增曲線的可重復性?

A 優化(hua)擴增(zeng)(zeng)(zeng)曲線考慮以(yi)下因(yin)素: 對于低(di)拷(kao)貝數模板，不(bu)穩定(ding)擴增(zeng)(zeng)(zeng)可(ke)能(neng)是(shi)(shi)因(yin)為(wei)達到(dao)檢測限或(huo)者是(shi)(shi)反(fan)應(ying)混勻程度不(bu)同（未混勻的反(fan)應(ying)擴增(zeng)(zeng)(zeng)效(xiao)率不(bu)佳）。另外，在(zai)低(di)溫情況下存貯，重組(zu)酶(mei)和輔助蛋白在(zai)50%甘油情況下形成沉淀(dian),也是(shi)(shi)可(ke)能(neng)導(dao)致不(bu)穩定(ding)擴增(zeng)(zeng)(zeng)的原因(yin)。所以(yi)，20x核(he)心反(fan)應(ying)mix在(zai)室溫下解凍并震(zhen)蕩渦旋將使其(qi)成為(wei)液(ye)體(ti)，不(bu)影響其(qi)功(gong)能(neng),并且有(you)效(xiao)提(ti)高(gao)擴增(zeng)(zeng)(zeng)效(xiao)率。不(bu)穩定(ding)擴增(zeng)(zeng)(zeng)也可(ke)能(neng)是(shi)(shi)因(yin)為(wei)master mix量不(bu)足，在(zai)加入(ru)體(ti)系(xi)前，用戶必須保(bao)證震(zhen)蕩后20x核(he)心反(fan)應(ying)組(zu)分均(jun)一。