德國 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發與研究，公司擁有強大的研發團隊，有*進的生物制劑，主要主要使命是花費較少的時間和成本，使客戶獲得得高質量的實驗數據。
ChromoTek的產品分類：
一、Nano-Trap系列；以產品結合物為標準，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 實驗的Chromobodies(質粒或細胞系形式)；
四、  高品(pin)質抗(kang)體（標(biao)簽蛋(dan)白抗(kang)體和(he)普通(tong)抗(kang)體）

由一(yi)個重鏈可(ke)變區組成的(de)羊駝單域抗體，是目前可(ke)以得到(dao)的(de)具 有完(wan)整功能的(de)穩定的(de)可(ke)結合抗原(yuan)的(de)小單位。分(fen)子量僅15 kDa,是 常規(gui)IgG抗體分(fen)子量的(de)1 /10。

分子量小

»分(fen)子量(liang)僅15 kDa,是傳統IgG抗體(150 kDa)的1 /10,或(huo)Fab片段(50 kDa)的1/3

»結(jie)構簡單(dan)穩定，僅一個(ge)重鏈(lian)可變區，特異性(xing)強

應用廣泛

»免(mian)疫(yi)沉淀、免(mian)疫(yi)熒光(guang)、超(chao)分辨率成像、表面等(deng)(deng)離子(zi)體共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)、 switchSENSE 技術等(deng)(deng)

穏定性高

»熱穩定(ding)性高，可(ke)常溫運輸

»化學(xue)穩(wen)定性高，可忍受苛刻的緩沖及洗(xi)脫條(tiao)件

多重驗證

»序(xu)列明確，結(jie)構清(qing)晰(xi)

»應用驗證(zheng)

» SCI文(wen)獻(xian)引(yin)用

親和力高

»表位結合能力強，不受空間(jian)環(huan)境影響(xiang)

»更高的組織穿透力(li)

Y Nano-Traps

GFP-Trap —免疫沉(chen)淀伴(ban)侶

產品特色:

»結(jie)構穩定——不(bu)會斷(duan)裂，無普通抗體(ti)輕(qing)鏈與重鏈污染

»性(xing)質穩定——耐(nai)高溫，耐(nai)苛刻的孵育條件和洗脫條件

»親和力高——抓捕牢固不易脫落，可顯(xian)著縮短反(fan)應時間

應用領域：

» Immunoprecipitation (IP) / Co-IP

» Mass spectrometry (MS)

» Enzyme activity measurements

» ChIP, RIP, iCLIP 分析

識別GFP衍生物：

» AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy

GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder

GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP K206A

» YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet

» CFP

» BFP

▲ GFP-Trap在免疫沉淀中抓取蛋白*
I: Input, FT: flow through (non-bound),
B: bound

Y Spot-Tag®

Spot-Tag® （序(xu)列PDRVRAVSHWSS）是基于Spot納(na)米抗(kang)體的優化(hua)試劑，用(yong)于多種捕(bu)獲和檢(jian) 測應用(yong)中。

優勢

»通用肽標簽(qian)，適用范圍廣泛

»針對內(nei)源(yuan)水平的標簽蛋白進行了優化

»納(na)米(mi)抗體技術實現高性能

Spot-Tag : PDRVRAVSHWSS

t t t t

Screened and mutated positions

應用

IP/Co-IP: Spot-Trap®

•單帶(dai)純化(hua)：下游應用中無(wu)輕鏈和(he)重鏈

•高親(qin)和力，N端或(huo)C端融合的解(jie)離常數KD低(di)至6-7 nM

• 65°C高(gao)穩定性，可(ke)耐pH范圍4-10

•樹(shu)脂(zhi)的結合能力2 1.4mg /ml （對于30 kDa的蛋白質(zhi)）

IF/ WB: Spot-Label

偶(ou)聯ATTO594的抗Spot-Tag期米抗體

•更小的(de)連接誤差(cha),更好(hao)的(de)組織穿透(tou)力

•成像性能優異

-用于WB極度敏感

Protein purification: Spot-Cap

基于期米抗體的親(qin)和(he)樹脂(zhi)

•一步(bu)法純化(hua)蛋白(bai)

Nano-Boosters & Nano-Labels是一(yi)類熒(ying)光(guang)探針,通過將靶(ba)(ba)標(biao)蛋(dan)白(bai)(bai)的(de)羊駝單域抗體VhH與熒(ying)光(guang)染料(liao)偶 聯在(zai)一(yi)起，Nano-Boosters能夠增(zeng)強(qiang)GFP、RFP等熒(ying)光(guang)蛋(dan)白(bai)(bai)的(de)信號強(qiang)度，Nano-Labels則能夠更準確的(de)定 位(wei)到靶(ba)(ba)標(biao)蛋(dan)白(bai)(bai)位(wei)置。

優勢

»增強熒光信號，成像效果更出(chu)眾

»熒光(guang)基(ji)團位(wei)移(yi)偏差小，定(ding)位(wei)更準確

»結(jie)構(gou)小巧(qiao)且(qie)穩定，通透(tou)性更佳

應用

»免疫熒光（IF）

»免疫細胞化學（ICC）

»免疫組織化學（IHC）

»組織透明三維成像（DISC。）

»超(chao)分辨顯微(wei)成像（SPM）

Nano-Caps是(shi)納米抗體(ti)/VhH偶聯的(de)瓊(qiong)脂糖珠,可(ke)以(yi)高效的(de)進行一步法純(chun)化蛋白。

優勢

» 一步(bu)法純化蛋白

»高結合力

»可重復使用

»洗(xi)脫溫(wen)和

應用

»蛋白純化

Chromobodies®是(shi)一種(zhong)熒(ying)光納米(mi)探針，通(tong)過將羊駝單域抗體VhH與熒(ying)光蛋(dan)白(bai)(bai)的(de)基因(yin)序列融合在一個重組(zu) 質粒(li)來實(shi)現內(nei)源性靶標蛋(dan)白(bai)(bai)在活(huo)細胞內(nei)的(de)可視(shi)化和實(shi)時分析(xi)。

優勢

»結(jie)枸(gou)小(xiao)巧穩定，易于轉化表達

»活細胞成像，內源性靶標實時(shi)分析

»超分(fen)辨顯微成像，高(gao)通(tong)量(liang)分(fen)析

»不干擾內源性靶標蛋白功能

應用

»高通(tong)量分析(HCA)

»免疫熒光(IF)

»活細胞成像(Live cell)

»超分辨顯微(wei)成像(SPM)

?

Nanobodies / VhHs

GFP VhH 是否結合 protein A 或者 protein G ?

GFP VhH 結(jie)合 protein A 但(dan)不(bu)結(jie)合 protein Go

Nano-Traps

GFP-Trap®對于N端GFP融合管白和C端GFP融合蛋白在親和力上是否有差別？

GFP-Trap®對于C端GFP融(rong)合蛋(dan)白有稍微(wei)更(geng)高的親和力。可以通過(guo)延長孵育時間(jian)（15-30min延長至(zhi)l-2h）來補償這(zhe)個差別。

能否用GFP-Trap®直接從組織樣品（例如位于變性緩沖液）中來純化帶GFP標簽的融合蛋白？

理論上來說(shuo)GFP-Trap®在苛刻的緩沖液體系（例(li)如含有0.1% SDS或者(zhe)1M尿素(su)的RIPA ）中恨穩定。

洗脫的GFP-結合蛋白是否會與lg二抗發生交叉反應？

GFP-Trap®申的(de)結(jie)合蛋白與山羊、小鼠、大鼠或者(zhe)人的(de)抗體沒有任(ren)何同(tong)源(yuan)性，所以不會與lg二抗發(fa)生非特異性交叉反(fan)應(ying)。

GFP-Trap®的載量如何？

通(tong)常 GFP-Trap® Agarose 和(he) GFP-Trap® Magnetic Agarose 每 10 卩(jie) L 懸浮液可以結合(he) 8 卩(jie) g GFP, GFP-Trap® Dynabeads 每 10 卩(jie) L 懸浮液可以結合(he)1 pgGFPo

Myc-Trap是否識別內源性的c-Myc蛋白？

我們(men)尚未發現Myc-Trap可(ke)以(yi)識(shi)別內源性(xing)的(de)c-Myc蛋(dan)白。由(you)于在(zai)c-Myc蛋(dan)白的(de)三維結構(gou)申對于結合Myc-Trap至關重(zhong)要的(de)一些抗 原表位被隱藏了(le)，所以(yi)在(zai)非變性(xing)條件下a-Myc蛋(dan)白很難被Myc-Trap識(shi)別到。

如何將帶Myc標簽的融合蛋白從Myc-Trap上溫和的洗脫下來？

可以用lx或者2x Myc-peptide競爭性的洗脫。替代性的也可以用8M尿素或者pH2.5的0.2M甘氨酸室溫下洗脫。

Spot標簽該構建到目的蛋白N端還是C端？能否將Spot標簽插入到目的蛋白中間？

N端或者(zhe)C端都(dou)能(neng)夠很好的識別。

對于Spot標(biao)簽(qian)(qian)插入到(dao)目(mu)的蛋(dan)白(bai)中間的得視情況而定。Spot標(biao)簽(qian)(qian)多肽需要以(yi)線性形式存在(zai)而且目(mu)的蛋(dan)白(bai)需要易進入不能(neng)有(you)空間阻 礙。需要插入到(dao)足鋸大且無結構(gou)的環(huan)，或無固有(you)結構(gou)的區(qu)域(yu)或較(jiao)長的linker,才能(neng)鋸被Spot標(biao)簽(qian)(qian)抗體(ti)識別。

在還原狀態下該如何將帶Spot標簽的融合蛋白洗脫下來？

可以用Spot標簽多(duo)肽競爭(zheng)性的洗脫(tuo)，或者也可以用pH 1210mM NaOH洗脫(tuo)（洗脫(tuo)之后(hou)需立即調整pH ）。