德國 ChromoTek 公司成立于2008年，致力于細胞生物學和蛋白質組學的研發與研究，公司擁有強大的研發團隊，有先進的生物制劑，主要主要使命是花費較少的時間和成本，使客戶獲得得高質量的實驗數據。
ChromoTek的產品分類：
一、Nano-Trap系列；以產品結合物為標準，包含磁珠系列和瓊脂糖珠子系列，還有96板系列；抗體結合物包括GFP Trap，RFP Trap，GST Trap，Dnmt1-Trap；Mk2-Trap；P53-Trap；Mdm4/ HdmX-Trap
二、 Booster系列；含GFP booster RFP booster；
三、 可用于HCA 實驗的Chromobodies(質粒或細胞系形式)；
四、  高品質抗(kang)體(ti)（標(biao)簽蛋(dan)白抗(kang)體(ti)和普通抗(kang)體(ti)）

由一個重(zhong)鏈可(ke)變(bian)區組(zu)成的(de)(de)羊駝單(dan)域抗體，是(shi)目前可(ke)以得到的(de)(de)具 有完整功能的(de)(de)穩定的(de)(de)可(ke)結(jie)合抗原的(de)(de)小單(dan)位。分(fen)子量僅15 kDa,是(shi) 常規(gui)IgG抗體分(fen)子量的(de)(de)1 /10。

分子量小

»分子量僅15 kDa,是傳統IgG抗體(150 kDa)的1 /10,或Fab片段(duan)(50 kDa)的1/3

»結構簡單穩定(ding)，僅一個重鏈(lian)可變區，特(te)異性強

應用廣泛

»免(mian)疫沉淀、免(mian)疫熒(ying)光、超分辨(bian)率成像、表(biao)面等離子體共振(SPR)、生物膜干涉(BLI)、 switchSENSE 技術等

穏定性高

»熱穩定性高，可常溫運輸

»化學穩定(ding)性(xing)高，可忍受苛刻的緩沖及洗(xi)脫條件

多重驗證

»序列明確(que)，結構清晰

»應用驗證

» SCI文獻(xian)引用

親和力高

»表位結合能力強，不受(shou)空間環境影響

»更高的組織穿透力(li)

Y Nano-Traps

GFP-Trap —免(mian)疫沉(chen)淀伴侶

產品特色:

»結構穩定——不會斷裂(lie)，無普通抗體輕鏈與重鏈污(wu)染

»性質穩定——耐高溫，耐苛(ke)刻(ke)的孵(fu)育條件和洗脫條件

»親和力高(gao)——抓(zhua)捕牢固不易脫落，可顯(xian)著(zhu)縮短反應時間

應用領域：

» Immunoprecipitation (IP) / Co-IP

» Mass spectrometry (MS)

» Enzyme activity measurements

» ChIP, RIP, iCLIP 分析(xi)

識別GFP衍生物：

» AcGFP, Clover, eGFP, Emerald, GFP, GFP5, GFP Envy

GFP S65T, mGFP, mPhluorin, PA-GFP, Superfolder

GFP, TagGFP, TagGFP2, monomeric eGFP K206A

» YFP, Citrine, eCitrine, eYFP, Venus, Ypet

» CFP

» BFP

▲ GFP-Trap在免疫沉淀中抓取蛋白*
I: Input, FT: flow through (non-bound),
B: bound

Y Spot-Tag®

Spot-Tag® （序列PDRVRAVSHWSS）是基于Spot納米(mi)抗體(ti)的優化試劑，用于多種捕獲和檢 測應用中。

優勢

»通用肽(tai)標簽(qian)，適用范(fan)圍廣泛

»針對(dui)內源水平(ping)的標簽蛋(dan)白(bai)進行了優化(hua)

»納米抗體技術實現(xian)高性能

Spot-Tag : PDRVRAVSHWSS

t t t t

Screened and mutated positions

應用

IP/Co-IP: Spot-Trap®

•單(dan)帶(dai)純化：下游(you)應用中(zhong)無(wu)輕(qing)鏈(lian)(lian)和重鏈(lian)(lian)

•高親和(he)力，N端或C端融合(he)的解離常數KD低至6-7 nM

• 65°C高穩定性(xing)，可耐pH范圍4-10

•樹(shu)脂的結合能力2 1.4mg /ml （對于30 kDa的蛋白(bai)質）

IF/ WB: Spot-Label

偶聯ATTO594的抗(kang)Spot-Tag期米抗(kang)體

•更小的(de)(de)連接(jie)誤差(cha),更好的(de)(de)組(zu)織穿(chuan)透力

•成像性(xing)能優異(yi)

-用于WB極度敏感

Protein purification: Spot-Cap

基于(yu)期(qi)米抗體的親和樹(shu)脂

•一步法純化(hua)蛋白(bai)

Nano-Boosters & Nano-Labels是一類熒(ying)光探針,通過將靶(ba)標蛋(dan)白的(de)(de)羊駝單域抗體VhH與(yu)熒(ying)光染(ran)料(liao)偶(ou) 聯(lian)在(zai)一起，Nano-Boosters能夠增強GFP、RFP等(deng)熒(ying)光蛋(dan)白的(de)(de)信號強度，Nano-Labels則能夠更(geng)準確的(de)(de)定 位到靶(ba)標蛋(dan)白位置。

優勢

»增強熒光信號，成像(xiang)效果更(geng)出眾

»熒光基團(tuan)位(wei)移偏差(cha)小，定位(wei)更準確(que)

»結構小巧且穩定，通(tong)透性更佳

應用

»免(mian)疫(yi)熒光(guang)（IF）

»免疫細(xi)胞化學（ICC）

»免疫組(zu)織化學（IHC）

»組織(zhi)透明三維成像(xiang)（DISC。）

»超分辨顯微成像（SPM）

Nano-Caps是納米抗體/VhH偶聯的(de)(de)瓊脂糖珠,可以(yi)高效的(de)(de)進行一步法純化蛋(dan)白。

優勢

» 一步法(fa)純化蛋(dan)白

»高結合(he)力

»可重復使用(yong)

»洗脫溫(wen)和

應用

»蛋白純(chun)化(hua)

Chromobodies®是一種(zhong)熒(ying)(ying)光納米(mi)探針，通過將(jiang)羊駝單(dan)域(yu)抗體VhH與熒(ying)(ying)光蛋(dan)白的基因序列(lie)融合(he)在一個(ge)重組 質粒來實現內源(yuan)性靶標蛋(dan)白在活細胞內的可視(shi)化和實時分析。

優勢

»結(jie)枸(gou)小(xiao)巧(qiao)穩定，易于轉(zhuan)化(hua)表(biao)達

»活細胞成像，內(nei)源性靶標(biao)實時分(fen)析

»超(chao)分(fen)辨(bian)顯(xian)微成像，高通量分(fen)析

»不干(gan)擾內源性靶標(biao)蛋白(bai)功能

應用

»高通量分析(HCA)

»免疫熒光(IF)

»活細胞成像(Live cell)

»超分辨顯微成像(SPM)

?

Nanobodies / VhHs

GFP VhH 是否結合 protein A 或者 protein G ?

GFP VhH 結合 protein A 但不結合 protein Go

Nano-Traps

GFP-Trap®對于N端GFP融合管白和C端GFP融合蛋白在親和力上是否有差別？

GFP-Trap®對于C端(duan)GFP融合蛋白有(you)稍(shao)微更高的親(qin)和力。可以通過延(yan)長孵育(yu)時間（15-30min延(yan)長至l-2h）來補(bu)償這個差別。

能否用GFP-Trap®直接從組織樣品（例如位于變性緩沖液）中來純化帶GFP標簽的融合蛋白？

理(li)論上來說GFP-Trap®在(zai)苛(ke)刻的緩沖(chong)液體(ti)系（例如含(han)有0.1% SDS或(huo)者1M尿素的RIPA ）中恨穩定。

洗脫的GFP-結合蛋白是否會與lg二抗發生交叉反應？

GFP-Trap®申的結合蛋白與山羊(yang)、小鼠、大(da)鼠或者人的抗(kang)體(ti)沒有(you)任(ren)何同(tong)源性，所以不(bu)會與lg二抗(kang)發生(sheng)非特異性交叉反應。

GFP-Trap®的載量如何？

通(tong)常 GFP-Trap® Agarose 和 GFP-Trap® Magnetic Agarose 每 10 卩(jie)(jie) L 懸浮(fu)(fu)液(ye)(ye)可以結合 8 卩(jie)(jie) g GFP, GFP-Trap® Dynabeads 每 10 卩(jie)(jie) L 懸浮(fu)(fu)液(ye)(ye)可以結合1 pgGFPo

Myc-Trap是否識別內源性的c-Myc蛋白？

我們尚未發現Myc-Trap可(ke)以識別(bie)內源(yuan)性的(de)c-Myc蛋白。由于(yu)在c-Myc蛋白的(de)三維結構申對(dui)于(yu)結合Myc-Trap至關(guan)重要的(de)一些(xie)抗 原表位被(bei)隱藏了(le)，所(suo)以在非變性條件下a-Myc蛋白很難被(bei)Myc-Trap識別(bie)到。

如何將帶Myc標簽的融合蛋白從Myc-Trap上溫和的洗脫下來？

可(ke)以(yi)用(yong)lx或(huo)者(zhe)2x Myc-peptide競(jing)爭性的洗(xi)脫。替代性的也可(ke)以(yi)用(yong)8M尿素或(huo)者(zhe)pH2.5的0.2M甘氨酸室溫下洗(xi)脫。

Spot標簽該構建到目的蛋白N端還是C端？能否將Spot標簽插入到目的蛋白中間？

N端或者C端都能夠很(hen)好的識別。

對于(yu)Spot標(biao)簽(qian)插(cha)入(ru)(ru)到目的(de)蛋(dan)白(bai)中間的(de)得(de)視(shi)情況而定(ding)。Spot標(biao)簽(qian)多肽需(xu)要以線性形式存在而且(qie)目的(de)蛋(dan)白(bai)需(xu)要易進入(ru)(ru)不能有(you)空(kong)間阻 礙。需(xu)要插(cha)入(ru)(ru)到足(zu)鋸大且(qie)無結構(gou)的(de)環，或(huo)無固有(you)結構(gou)的(de)區域或(huo)較(jiao)長的(de)linker,才能鋸被(bei)Spot標(biao)簽(qian)抗體識別。

在還原狀態下該如何將帶Spot標簽的融合蛋白洗脫下來？

可以(yi)(yi)用Spot標簽多肽競爭性(xing)的洗脫，或者(zhe)也可以(yi)(yi)用pH 1210mM NaOH洗脫（洗脫之后需立即(ji)調整pH ）。