默瑞生物推出現貨（TwistAmp Liquid Basic kit/TwistAmp EXO kit）液態重組酶聚合(he)酶擴增 (RPA)試(shi)(shi)劑(ji)盒，這(zhe)些(xie)試(shi)(shi)劑(ji)盒非常適合(he)需要(yao)不(bu)使(shi)用(yong)熱循環儀就能在15分鐘內完成 DNA/RNA 擴增的(de)實驗室以及想要(yao)靈活構建(jian)試(shi)(shi)驗體系的(de)研究人員使(shi)用(yong)。

TwistAmp® Liquid試(shi)劑(ji)盒(he)提供經甘油穩定化(hua)處理的(de)液(ye)態RPA試(shi)劑(ji)，該形(xing)態對于(yu)(yu)在實驗(yan)(yan)室執(zhi)行 PCR 和其(qi)他基于(yu)(yu)酶的(de)反應(ying)的(de)任何(he)人來說都非常熟悉。這些試(shi)劑(ji)各(ge)自(zi)(zi)裝于(yu)(yu)單獨的(de)試(shi)管(guan)中(zhong)，用戶可(ke)隨意從中(zhong)移取任何(he)量的(de)酶混(hun)合液(ye)來構(gou)建自(zi)(zi)己所選的(de)RPA反應(ying)體積，配制用于(yu)(yu)多(duo)次反應(ying)的(de)預混(hun)液(ye)，或者以各(ge)種 RPA 組分比例進(jin)行實驗(yan)(yan)以優化(hua)試(shi)驗(yan)(yan)。

除了具有(you)室(shi)溫穩定(ding)性的(de)(de)凍干態(tai)(tai)TwistAmp® RPA試(shi)(shi)劑盒這(zhe)一(yi)旗艦產(chan)品，本次新推出的(de)(de) TwistAmp® Liquid試(shi)(shi)劑盒是現場或定(ding)點試(shi)(shi)驗開(kai)發的(de)(de)理想之選。液體形態(tai)(tai)讓實(shi)驗室(shi)更容(rong)易地在日常工作中使用快速簡單的(de)(de)RPA法(fa)（該方法(fa)有(you)時甚至采用與PCR相同的(de)(de)引物(wu)）取代 PCR法(fa)，以及更容(rong)易地開(kai)發出定(ding)制的(de)(de)試(shi)(shi)驗。

TwistAmp利用RPA恒溫擴(kuo)增技術發表(biao)的論文

Development of real-time reverse transcription recombinase polymerase amplification (RPA) for rapid detection of peste des petits ruminants virus in clinical samples and its comparison with real-time PCR test 實時反轉(zhuan)錄重組酶聚合酶擴增技術（RPA）的研究進展

重組酶聚(ju)合(he)酶擴增法(fa)（RPA）快速檢測

3.非洲豬瘟病(bing)毒(du)實時熒光重組酶(mei)聚合酶(mei)擴增技術(RPA)檢測方法的建立

HADENG Chu-riya1,2, FAN Xiao-xu1, ZHAO Yong-gang1, WANG Shu-juan1, ZHANG Zhi-cheng1, GE Sheng-qiang1, LI Lin1, WU Xiao-dong1, WANG Zhi-liang1   

1. National Research Center for Exotic Animal Disease, China Animal Health and Epidemiology Center, Qingdao 266032, China;
2. College of Veterinary Medicine, Inner Mongolia Agricultural University, Hohhot 010018, China非洲豬瘟(wen)(wen)(African swine fever,ASF)是由非洲豬瘟(wen)(wen)病(bing)毒(du)(African swine fever virus,ASFV)感染引(yin)起的(de)(de)(de)(de)一種(zhong)急性(xing)(xing)、熱性(xing)(xing)、高(gao)度(du)(du)接觸性(xing)(xing)傳染病(bing),給(gei)養豬業造成了嚴(yan)重(zhong)的(de)(de)(de)(de)經濟損失.本(ben)研(yan)究利(li)用重(zhong)組酶聚合酶擴(kuo)增(zeng)技術(RPA),針對(dui)ASFV B646L(p72)基因設計(ji)了3組引(yin)物和探針,并進(jin)行篩選、反(fan)應(ying)條件(jian)優化、靈(ling)敏性(xing)(xing)、特異性(xing)(xing)和重(zhong)復性(xing)(xing)試(shi)驗,建(jian)立了實時熒(ying)光RPA方法.結果顯示,該方法在(zai)(zai)39℃、20 min內即可檢(jian)測10個(ge)拷貝的(de)(de)(de)(de)DNA分子,且與(yu)豬瘟(wen)(wen)病(bing)毒(du)、豬圓環病(bing)毒(du)2型、豬細小(xiao)病(bing)毒(du)、豬偽狂(kuang)犬病(bing)病(bing)毒(du)均(jun)無交叉(cha)反(fan)應(ying),檢(jian)測5.5×106至5.5×100拷貝/μL共(gong)7個(ge)稀(xi)釋度(du)(du)樣品在(zai)(zai)各時間(jian)點的(de)(de)(de)(de)熒(ying)光強度(du)(du),變異系數范圍在(zai)(zai)0.38％～28.30％.該等溫、快速擴(kuo)增(zeng)方法可用于ASFV的(de)(de)(de)(de)定性(xing)(xing)檢(jian)測,為中國(guo)ASFV感染的(de)(de)(de)(de)早期診(zhen)斷提供技術支持,對(dui)疫情暴發后相應(ying)控制方案的(de)(de)(de)(de)制定具有重(zhong)要意義.

重組酶(mei)聚合酶(mei)擴增(zeng)法(fa)（RPA）-一種簡(jian)便、快速、經濟的貓(mao)皰疹病毒(du)-1特異性檢測(ce)方法(fa)

· Jianchang Wang,

· Libing Liu,

· Jinfeng Wang,

· Xiaoxia Sun,

Wanzhe Yuan 

2. 監測HIV的新(xin)型移(yi)動DNA檢測技術（RPA技術）

2014年6月9 訊(xun) /生物谷BIOON/ --近日，刊登在雜志(zhi)Analytical Chemistry上的(de)一篇研(yan)(yan)究(jiu)報告中(zhong)，來自(zi)美國萊斯大學的(de)科學家(jia)通過研(yan)(yan)究(jiu)開(kai)發了一種簡便高準確率的(de)檢(jian)測(ce)技術，來檢(jian)測(ce)患者機體(ti)中(zhong)的(de)HIV跡(ji)象及(ji)病(bing)情發展程度。

研究者Rebecca Richards-Kortum表示，當前(qian)用于(yu)診斷(duan)嬰兒HIV狀況的金(jin)標(biao)準就是(shi)依賴實驗室設備及當前(qian)可用的檢測(ce)技(ji)術來對其機體中(zhong)的病毒載量進行監(jian)測(ce)，而本文中(zhong)研究者則(ze)開發(fa)出了基于(yu)核酸的新型HIV檢測(ce)技(ji)術。

這項新(xin)型的(de)(de)檢(jian)測(ce)(ce)技術基于(yu)PCR的(de)(de)方法對(dui)重(zhong)組(zu)聚合酶進行(xing)放大(da)（RPA），從而(er)取(qu)代了復雜的(de)(de)實驗室檢(jian)測(ce)(ce)步驟，其可以(yi)對(dui)血液中(zhong)(zhong)的(de)(de)遺(yi)傳標記物進行(xing)快(kuai)速多重(zhong)放大(da)，從而(er)使(shi)得(de)病毒(du)的(de)(de)遺(yi)傳標記物可以(yi)很(hen)容易(yi)被檢(jian)測(ce)(ce)到；利用qRPA檢(jian)測(ce)(ce)就可以(yi)對(dui)HIV DNA中(zhong)(zhong)的(de)(de)特(te)殊序列(lie)進行(xing)熒光探針的(de)(de)靶向(xiang)標記，從而(er)使(shi)用機器(qi)進行(xing)定量檢(jian)測(ce)(ce)，后通過對(dui)熒光DNA進行(xing)軟件分析(xi)就可以(yi)使(shi)得(de)醫生們掌(zhang)握HIV在患(huan)者機體中(zhong)(zhong)的(de)(de)動態信息。

Rohrman教(jiao)授(shou)說(shuo)道，我(wo)們可以通過放大(da)內部陽性對(dui)照對(dui)測(ce)(ce)試進行(xing)校準，而且可以利用HIV序列(lie)的相同引物進行(xing)擴增，因此(ci)檢測(ce)(ce)實驗可以正常進行(xing)；這(zhe)項新型技(ji)術可以幫助追蹤老年患者機體中的病毒載量，這(zhe)對(dui)于(yu)臨(lin)床醫(yi)生們實時監(jian)測(ce)(ce)病人體內的HIV情(qing)況，從而來確定(ding)患者是(shi)否需(xu)要(yao)及時治療提供了一定(ding)的參(can)考數據。

從臨床角度來講，基于DNA的HIV檢測(ce)可(ke)以在四個數量(liang)級(ji)上對HIV的病毒載量(liang)進(jin)行(xing)定(ding)量(liang)檢測(ce)，盡管(guan)當前研(yan)究(jiu)者(zhe)使用(yong)熱循環儀來進(jin)行(xing)檢測(ce)，但(dan)是研(yan)究(jiu)者(zhe)正在著力開發一(yi)種新型的檢測(ce)技術(shu)，使得整(zheng)個操作(zuo)步驟維(wei)持在室溫(wen)(wen)和(he)體溫(wen)(wen)之間，從而確保實驗的通用(yong)性和(he)準確性。

附: TwistAmp liquid試劑盒Q&A

Q 20x核心反應mix有沉淀,是否影響其功能?

A在低(di)溫保存時(shi), 重組酶和(he)輔助蛋白在50%甘油中20x核心反應mix中有時(shi)會(hui)發生(sheng)可逆(ni)的共(gong)沉淀反應.所以在室溫融化混(hun)勻后離心使其(qi)返回溶液形(xing)式并不影響其(qi)功能。

Q 使用Liquid試劑盒做多重實驗，能否(fou)制備master mix?

A 可(ke)(ke)以(yi)。Oligos, 2x Reaction Buffer, water, dNTPs and 10x E-mix可(ke)(ke)以(yi)預先混合，置于冰上幾個小時，在很多(duo)實(shi)(shi)例中可(ke)(ke)以(yi)過夜(ye)保存(cun)（性(xing)能(neng)上有(you)任何改變都需(xu)要客(ke)戶自行實(shi)(shi)驗(yan)和評價(jia)）。一(yi)旦(dan)加入20x核(he)心(xin)酶，短期保存(cun)在冰上也是(shi)可(ke)(ke)以(yi)的。

Q 使用Liquid試劑盒如何提高重復率和RNA模板的擴增率?

A 先將RNA模板和醋酸(suan)鎂混合后加(jia)入反應體(ti)系中，RNA的三(san)級(ji)結(jie)構(gou)會抑制逆(ni)轉(zhuan)錄酶(mei)的活性，所以加(jia)入RNA和醋酸(suan)鎂時，將兩者分別(bie)加(jia)到在管(guan)內(nei)壁兩側或者將醋酸(suan)酶(mei)加(jia)在管(guan)內(nei)蓋中，同時離心(xin)混入體(ti)系，這種操作會提高反應性能。

Q 在TwistAmp Liquid E-mix中有沉淀，還(huan)能使(shi)用(yong)嗎(ma)?

A 可以。少量(liang)磷酸肌(ji)酸會(hui)發生沉淀不會(hui)影響RPA反應，只需(xu)在實驗前通過(guo)渦(wo)旋將沉淀重懸(xuan)離心即可。

Q 在使用Liquid試劑盒(he)時，是否能夠使用dUTP/生(sheng)物素(su)（酰）化dUTP?

A 可以，請參考

Q 小(xiao)的RPA液(ye)體反(fan)應體系是(shi)多少?

A 小低(di)至PL級(ji)，請參考

Q 液體(ti)(ti)反應體(ti)(ti)系中需要加入多少dNTPs?

A 1.8mM(總)dNTPs 作(zuo)為起(qi)始量即可。用戶(hu)也可以根據自(zi)身實驗優化濃(nong)度,有時1-12mM均適用。

Q 如何提(ti)高擴增曲線的可重(zhong)復性?

A 優化擴增曲線考慮以下因素: 對于低拷貝數模板，不穩定擴增可能是因為達到檢測限或者是反應混勻程度不同（未混勻的反應擴增效率不佳）。另外，在低溫情況下存貯，重組酶和輔助蛋白在50%甘油情況下形成沉淀,也是可能導致不穩定擴增的原因。所以，20x核心反應mix在室溫下解凍并震蕩渦旋將使其成為液體，不影響其功能,并且有效提高擴增效率。不穩定擴增也可能是因為master mix量不足，在加入體系前，用戶必須保證震蕩后20x核心反應組分均一。
默瑞生物

默(mo)瑞(rui)(上海)生(sheng)(sheng)物(wu)科(ke)(ke)技有限(xian)公司，作為專業(ye)的生(sheng)(sheng)命科(ke)(ke)學(xue)產(chan)(chan)品推廣與服(fu)務商，以(yi)“創(chuang)新，專業(ye)，共贏(ying)”的理念，不斷強(qiang)化服(fu)務體(ti)(ti)系，提(ti)升(sheng)客(ke)(ke)戶體(ti)(ti)驗(yan)，以(yi)莫納生(sheng)(sheng)物(wu)產(chan)(chan)品為主(zhu)線，結合(he)國內外(wai)優質產(chan)(chan)品提(ti)供高(gao)標準完(wan)整解決方(fang)案(an)，幫助科(ke)(ke)研客(ke)(ke)戶和(he)生(sheng)(sheng)物(wu)技術企業(ye)高(gao)效創(chuang)新，加(jia)速(su)轉化，創(chuang)造更多優質產(chan)(chan)品，提(ti)升(sheng)社會福祉(zhi)，實現多方(fang)共贏(ying)。

默瑞生(sheng)物創立以來，已經陸續導入

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